研讨双酚类似物：双酚A（BPA），双酚AF（BPAF），双酚F（BPF）和双酚S（BPS）对内排泄的搅扰效果。

  HepG2细胞分别用四种BP（BPA，BPAF，BPF和BPS）处理后，经过核磁共振（NMR）剖析其代谢产品，糖代谢PCR芯片（wcgene biotech，上海启因生物）剖析其基因表达状况。

  代谢紊乱是由BPs医治引起的（图1）。从OPLS-DA得分图中，在四个BP代谢组学数据集和溶剂对照组之间观察到明显的差异（图2）。

  图1主成分剖析（PCA）得分来源于细胞培养基样品的NOESY光谱的NMR数据。（A）溶剂对照和BPA处理的PCA得分图;（B）溶剂对照和BPAF处理的PCA得分图;（C）溶剂对照和BPF处理的PCA得分图;（D）溶剂对照和BPS处理的PCA得分图。

  图2 从细胞培养基样品的noesy光谱的核磁共振数据和200个随机置换实验的验证模型得到的opls-da分数图。（A）溶剂对照和BPA处理的OPLS-DA得分图;（B）用于溶剂对照和BPAF处理的OPLS-DA得分图;（C）溶剂对照和BPF处理的OPLS-DA得分图;（D）溶剂对照和BPS处理的OPLS-DA得分图。

  图3 OPLS-DA负荷图和HEPG2细胞培养基中明显的差异代谢物判定。（A）溶剂对照与BPA处理;（B）溶剂对照与BPAF处理;（C）溶剂对照与BPF处理;（D）溶剂对照与BPS处理。 刻度红（↑↑）标明差异十分明显; 突变黄（↑）标明差异明显; 突变蓝（NS）标明差异无关紧要。

  剖析BP类似物打乱的代谢途径。咱们得知7个途径（苯丙氨酸代谢; D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢;赖氨酸降解;氨基酰基-tRNA生物组成;丙酮酸代谢;甘氨酸，丝氨酸和苏氨酸代谢;丙氨酸，天冬氨酸和谷氨酸代谢）与15在BPA露出中判定的代谢物相关（图4A）。六个途径（苯丙氨酸代谢; D -谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢;丙酮酸代谢;甘氨酸，丝氨酸和苏氨酸代谢;丙氨酸，天冬氨酸和谷氨酸代谢;糖酵解或糖原异生），这中心还包含两个以上的方针，在整一个完好的进程中被BPAF影响（图4B）。在相同的规范下，触摸BPF后，8种途径（D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢;赖氨酸降解;氨基酰基-tRNA生物组成;丙酮酸代谢;甘氨酸，丝氨酸和苏氨酸代谢;丙氨酸，天冬氨酸和谷氨酸代谢;甲烷代谢;乙醛酸和二羧酸酯代谢）被影响（图4C）。一起，BPS影响了三种途径（丙酮酸代谢;丙氨酸，天冬氨酸和谷氨酸代谢;甲烷代谢）（图4D）。

  图4. 代谢物组富集剖析（MSEA）的总结图（A）溶剂对照与BPA处理; （B）溶剂对照与BPAF处理; （C）溶剂对照与BPF处理; （D）溶剂对照与BPS处理。（a）苯丙氨酸代谢; （b）D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢;（c）赖氨酸降解;（d）氨基酰基-tRNA生物组成;（e）丙酮酸代谢;（f）甘氨酸，丝氨酸和苏氨酸代谢;（g）丙氨酸，天冬氨酸和谷氨酸代谢;（h）糖酵解或糖异生;（i）甲烷代谢;（j）乙醛酸和二羧酸代谢。

  糖代谢PCR芯片检测BP处理后基因表达水平的改变：84个选定基因和数据热图如图5所示。糖代谢PCR芯片剖析标明，虽然四种BP具有损坏葡萄糖代谢的才能，但它们或许经过不同的机制起效果：BPAF增加了丙酮酸激酶（PKLR）的表达水平，这在某种程度上预示着与NMR成果一起的增强的糖酵解。但是，其他三种BP类似物降低了葡萄糖激酶（GCK）的表达水平，标明葡萄糖感知妨碍。

  图5 热图显现pcr芯片测定hpg2细胞露出48小时后糖代谢基因组的倍数改变。

  图6.经过1 H NMR剖析和PCR阵列，检测到的差异代谢物（黑色）和差异表达基因（赤色），并提出被损坏的代谢途径。

  成果标明，BP类似物导致7-15种代谢物的紊乱，这些代谢物被分类为糖酵解（丙酮酸）和三羧酸循环（乙酸盐，乳酸盐）中的氨基酸（丙氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸），中心体和终产品。依据代谢物和途径的数量排序依次为BPF BPA BPAF BPS。一起打乱的通路（丙酮酸代谢，丙氨酸，天冬氨酸和谷氨酸代谢）标明糖酵解增强。研讨成果一起标明，运用代谢组学和PCR阵列能了解机制的潜在效果，并确认未来方针危险评价的潜在方针。